2022-914
一、材料與儀器：大鼠、裂解緩沖液、濃蔗糖溶液、超速離心機、組織研磨器二、實驗步驟：1.配制裂解緩沖液和濃蔗糖溶液（PMSF在使用前添加），冰上放置。裂解緩沖液:①0.25mol/L蔗糖網織紅細胞標準緩沖液（RSB）②0.25mol/L蔗糖（超級純）③10mmol/Tris-HCl(pH7.4)④10mmol/LNaCl⑤3mmol/LMgCl2⑥1mmol/LDTT⑦0.5mmol/LPMSF(用前從溶于乙醇的100mmol/L貯存液中添加）濃蔗糖溶液:①2mol/L蔗糖RS...
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材料與儀器：細胞、TBS抽提緩沖液、離心管實驗步驟：步驟1：根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟1進行操作。(1)細胞樣品①單層培養的細胞以用冰預冷的TBS將單層細胞洗滌2次，用刮棒把細胞刮入約0.5ml的TBS中，將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中，用1mlTBS沖洗培養皿，并入離心管中的細胞懸液。于4℃以1500g離心10分鐘以收獲細胞。用5~10倍體積經冰預冷的TBS重懸細胞并再度離心。用TE(pH8.0）重懸細胞，使細胞密度為5x107細胞/ml，轉移至一個三角燒瓶中...
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2022-89
細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱為有限細胞系，如可以連續培養，則稱為連續細胞系，培養50代以上并無限培養下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講，可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間...
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2022-714
實驗方法1.將實驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養皿內剪碎，加入適量胰酶，轉移至15ml離心管內，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結束后，加入H-DMEM*培養基終止反應，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養皿內，加入2ml*...
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外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細胞培養上清以及各種體液中，細胞外泌體研究是近些年研究的熱點。細胞外泌體主要原理是根據外泌體的密度、粒徑、沉降系數和親和力等差異進行分離，提取方法包括傳統的差速離心、密度梯度離心，以及后來發展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細胞外泌體研究常見問題：1、培養細胞...
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1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細胞培養皿內，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養箱內培養。4.4小時后去除培養皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養基，繼續培養。5.一般情況下48小時后可見...
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